**甘油的特性与应用**

甘油是甘油三酯水解后的重要产物，其含量可以作为甘油三酯水解反应的可靠检测指标，且相较于游离脂肪酸，检测过程更加便利。本试剂盒经过优化设计，能够有效检测实体组织及细胞中的甘油含量，线性检测范围为10-1200µmol/L。

**检测原理**

在检测过程中，甘油在ATP的作用下，被甘油激酶转化为3-磷酸甘油，随后通过甘油磷酸氧化酶的催化产生过氧化氢。在过氧化物酶的作用下，颜色底物转化为苯基氨基亚胺，其光密度与甘油浓度成正比，这一过程为甘油浓度的测定提供了基础。

**适用范围**

本试剂盒适用于测定实体组织及细胞中的甘油浓度，具体组成包括：(1) 裂解液50ml (2) R1试剂16ml (3) R2试剂4ml (4) 4mmol/L甘油标准品1ml，储存条件为4ºC，保质期为6个月。

**所需设备**

进行检测所需设备包括酶标仪、生化分析仪或721、722型可见光分光光度计，最佳工作波长为550nm，如无法达到该波长，可优先选择570nm，其次为530或490nm。

**组织与细胞裂解步骤**

对于细胞的裂解，需先消化并离心收集细胞，通常在6孔板每孔约需2x10⁶个细胞，75cm²瓶中约需1x10⁷个细胞。建议在每1~2x10⁶细胞中加入0.1ml裂解液，震荡或涡旋处理后静置10分钟。对于动物组织，务必在新鲜动组织剪切称重后再进行保存，避免冻存后的不准确测量。建议每1mg组织加入10µl裂解液，以降低因样品间差异引起的误差。

**裂解液处理及后续步骤**

将适量的上清液转移到15ml离心管中进行后续处理，其余裂解液可用于蛋白定量或存储于-20ºC。使用270ºC加热10分钟以灭活脂肪酶，注意可能出现的絮状沉淀。将样品在室温下以5000rpm离心5分钟，上层清液即可用于酶学测定。

**工作溶液的配制**

按4:1的比例将4ml试剂R1与1ml试剂R2混合，需及时使用或在4ºC保存不超过1天，变色后需废弃。在稀释标准品时，使用蒸馏水、生理盐水或与样品缓冲液相同的液体，将4mM甘油标准品进行倍比稀释，得到不同浓度的标准品，通常选择其中4~6个浓度即可，并设置0浓度的对照反应管。

**甘油的测定步骤**

待测样品体积需控制在10µl内，过多的样品可能抑制反应。在237ºC或25ºC环境下反应10分钟，反应平稳后，颜色在60分钟内稳定。使用蒸馏水和工作液的空白管进行零点调校后，测定各管的OD值，绘制标准曲线以计算甘油浓度。可使用Excel绘图，将各标准管的OD值作为y轴，标准品浓度作为x轴，添加趋势线以显示公式和R²值。

最后，以每mg蛋白浓度或细胞数校正甘油含量，从而确保结果的准确性。值得一提的是，通过**尊龙凯时人生就博**品牌提供的高品质试剂与设备，可以提高实验的可靠性与重复性，助力生物医疗领域研究的进一步发展。