尊龙凯时人生就博的人恶性黑色素瘤细胞SK-MEL-2培养指南

一、细胞培养条件

细胞名称：人恶性黑色素瘤细胞SK-MEL-2

生长特性：贴壁生长

冻存条件：无血清冻存液（货号：C7001）

培养体系：1640培养基 + 10% FBS + 1% 双抗

传代方法：建议第一次以1:2比例进行传代。同时，建议在2天后更换培养基以维持细胞生长状态。

备注：请使用无菌离心管收集培养基，以便后期对比培养。如果对比效果不佳，建议直接购买我们的完整培养基。

二、细胞处理流程

一旦收到细胞，建议培养至良好状态后，灌满完整培养液并封好瓶口，以确保细胞运输质量。在收到细胞后，使用75%酒精对细胞瓶表面进行消毒，然后在超净工作台内进行严格的无菌操作，将细胞置于37℃、5% CO2的培养箱中静置3-4小时，确保细胞状态恢复稳定。通过显微镜观察细胞生长情况，并对细胞进行多倍数拍照留存，前三天的照片将作为售后服务的重要依据。注意，在将密封的培养瓶放入培养箱时，请将盖子稍微松开。传代后，建议一瓶使用原瓶的完全培养基，另一瓶使用自配的完全培养基，以便进行对比培育。

三、细胞培养步骤

a. 细胞传代

1. 若细胞汇合度未超过80%，请将瓶内完全培养液收集至离心管中，保留5ml培养基，放入37℃、5% CO2培养箱中培养。

2. 如果细胞密度超过80%，可以进行传代。具体步骤如下：

1. 去除上清液，使用不含钙、镁离子的PBS冲洗细胞1-2次。
2. 加入约1-2ml 0.25%胰蛋白酶消化液至培养瓶中，放入37℃的培养箱中消化1-2分钟，观察细胞脱落情况。若细胞大部分变圆，并开始脱落，迅速取回操作台，轻轻敲击培养瓶后添加5ml以上完全培养基终止消化。
3. 轻轻吹打细胞使之完全脱落，吸出后将悬液转移至15ml离心管中，采用1000RPM的条件离心5分钟，弃去上清液，加入1-2ml完全培养基重悬细胞。
4. 按照1:2比例进行细胞分瓶传代（两个T25瓶），并补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃、5% CO2的培养箱中培养。

b. 细胞冻存

1. 当细胞生长至覆盖培养瓶80%时，去除培养液并用PBS清洗一次。
2. 添加约1ml的0.25%胰蛋白酶消化液，倒置并观察至细胞变圆收缩后，加入5ml完全培养液终止消化。轻轻吹打细胞脱落后，将悬液转移至离心管中，进行1000RPM离心5分钟。
3. 弃去上清，沉淀细胞后加入1ml的无血清冻存液（货号：C7001），混匀后转入冻存管中。
4. 将冻存管直放于-80℃冰箱中，若后续转入液氮罐，需在-80℃保存24小时以上后再转移。

c. 细胞复苏

1. 从液氮中取出冻存管（务必佩戴防护面具），迅速置于37℃水浴中解冻，直至冻存管内无结晶后用75%酒精消毒外壁。
2. 将冻存管内细胞转移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000RPM离心5分钟。
3. 弃去上清，加入5ml完全培养基重悬细胞，接种至T25培养瓶，置于37℃、5% CO2培养箱中。
4. 第二天更换为新鲜完全培养基继续培养。

四、注意事项

在运输过程中，部分细胞可能会因未牢固贴壁而发生脱落，这是正常现象。可使用以下方法处理：将培养瓶内培养液收集至离心管中，1000RPM离心5分钟后，收集上清进行对比培养。加入1-2ml胰酶，轻轻吹打后消化1-2分钟，随后用5ml完全培养基终止反应，再离心清除上清，重悬细胞。最后按1:2比例分瓶传代（两个T25），补充新培养基至5-8ml/瓶，置于37℃、5% CO2的培养箱中培养。

五、售后条款

1）细胞出现问题的重发情况：

1. 因运输中出现问题，如细胞丢失、瓶身破损或培养液漏液，可进行重发；
2. 若收到细胞48小时内发现污染，需提交实验结果以核实情况，合格后可重发；
3. 常温发货的细胞静置24小时或干冰运输的细胞复苏后24小时仍未存活的，需提供真实的细胞状态照片后重发；
4. 干冰运输的细胞复苏后24小时内或常温运输细胞静置4小时未开封发现污染，均可重发；
5. 出现细胞活性问题的，需在7天内提供真实实验结果，用台盼蓝染色法判断细胞活力，合格后可重发。
6. 收到细胞当天及2、3天内请拍照，若未告知视为产品合格。若在4-7天内出现问题，需提供前3天的照片和操作细节，以技术人员的判断负责重发。

2）不予重发的情况：

1. 客户因自身原因造成的细胞污染，不重发；
2. 客户不当操作导致的细胞状态不佳，不重发；
3. 非本库推荐的培养体系导致的细胞状态不良，不重发；
4. 细胞状态不佳且未提供前3天的照片，不重发；
5. 经历其他处理的细胞，亦不重发；
6. 收到后2天内未告知的情况，不重发；
7. 具体情况另行判断。

对于细胞培养及应用相关的任何疑问，可随时咨询尊龙凯时人生就博的专业团队，我们将竭诚为您服务！